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传递窗在PCR实验室的应用及PCR实验室需要传递窗吗

发布日期:2020-05-22 11:24 浏览次数:

PCR实验室
PCR实验室由缓冲区及四个单独的工作区域
 缓冲区、试剂储存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能从试剂储存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
PCR实验室空调通风系统设计及压力控制
PCR实验室关键控制好各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。要严格控制送、排风的比例以保住各实验区的阶梯式压力要求及达到安全排放标准。
Pcr实验室又叫基因扩增实验室。PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称。是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统,能迅速掌握患者体内的病毒含量,其精确度高达纳米级别,精确检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否传染、传染性有多强、是否必要服药、肝功能有否异常改变能及时判断病人适合使用哪类抗病毒药物、判断药物疗效如何、给临床缓解提供了可靠的检验依据
 
 
PCR实验室建立方法
1、建立样品准备区
这个区域专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施:⑴PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。⑵组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理,以根据应用的需要提取DNA或RNA。⑶用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。⑷DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作,以防止在汲取样品时有气溶胶遗留。⑸大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管汲取。⑹管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生,而且管子不能用力崩开,这样会产生气溶胶。⑺任何时候都应该穿实验服和带手套,手套要经常更换,尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间,经常清洗。
2、样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题,反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。
3、建立前PCR区。
该去专门用于准备各种反应,这个区域必须保持干净,而且没有来自克隆和样品准备的污染。前PCR区必须要有试剂和准备,特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。
 
4、PCR实验室试剂的操作。
⑴所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。⑵所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm过滤的,并且是高压灭菌。⑶在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。⑷所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。⑸所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。⑹新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。⑺样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。
5、在前PCR区建立PCR混合物。
⑴可以把即刻可用的"主混合物"溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃,在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。⑵如果你的实验室使用多套引物,以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济,可以考虑分装保存够一天的PCR成分。⑶作为一个规则,应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度。而且,你也希翼通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。⑷阴性样品要与每组样品同时做,以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染,阴性对照应该包括核酸以外的所有试剂。⑸当做阳性对照时,有两个理由决定了应该使用少数量的核酸。⑹由于必须有对照反应,对照模板的特点应该予以考虑。
6、控制污染的方法。
已设计出很有力的酶学方法用来消除一种形式的污染-使用UNG,这一技术能有效地消除由PCR产物引起的污染。另一种控制污染的方法是使用紫外线,这种方法不能完全消除污染问题,但可以将污染降低几个数量级。
7、后PCR区PCR完成以后,需要分析样品并说明数据,应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方。后PCR活动中使用的所用试剂、一次性耗材和仪器都必须是专门用于这一目的,决不能把实验室这一区域的试剂或仪器用于任何前PCR活动
PCR实验室标准
基因扩增实验又称PCR实验,其特点是能将微量的DNA大幅增加,PCR是分子生物学研究和实验的常规方法,广泛应用于生物学各个领域,如:检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病,癌基因的检测和诊断,DNA指纹、个体识别、亲子鉴别及法医物证,动、植物检疫,动物及其衍生产品检测,动物饲料、化妆品、食品卫生检测,转基因作物与转基因微生物检测等。
PCR设计依据
 《医疗机构临床基因扩增管理法》
 《生物安全实验室建筑技术规范》 GB50346-2004
《洁净厂房设计规范》GB50073-2001
空气过滤器》GB13554-92
《实验室生物安全通用要求》GB19489-2004
《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》WS233-2002 中华人民共和国卫生部
PCR实验室平面布
 
 基因扩增实验室又称PCR实验室,实验室原则上分为四个单独的工作区域,前两区为扩增前区,后两区为扩增后区。扩增前区与扩增后区应严格分开。实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂准备区->样品处理区->扩增区->扩增产物分析区,不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。各工作区域应设置缓冲间,工作间与缓冲间之间宜安装连锁装置。不同功能的核酸检验工作区应是分隔独立的工作室,并有明显的标志,各区间不能直通。各区之间如果是紧密相连,需安装物品传递窗。每个工作区域的顶部应安装紫外灯,紫外灯的波长为254 nm,安装数量为每20 m2安装一支40W的紫外灯。
 
实验室较为理想的布局模式为有一个专用走廊,试剂准备区、标本制备区、扩增区和产物分析区很规范地排列在一起,前三个区各有一个缓冲间,可供换工作服和工作鞋使用,顶上可装一紫外灯。内实验区域设为正压或常压状态,缓冲间内设为负压状态(可上设一抽风装置),使这三个区的空气流向为由实验区域内向外,缓冲间内通向内实验室和走廊的门可安装一种连锁装置,当一个门打开时,另一门必须处于关闭状态,防止出现两个门同时打开的情况。产物分析区可不设缓冲间,但应设为负压状态(装一个排风扇即可),使空气流向由外向内,以防止扩增产物的随空气流出。每一区域都须有明确的标记,工作按试剂准备区、标本制备区、扩增区至产物分析区单一流向进行,各区的仪器设备包括工作服、鞋、实验记录本和笔等都必须专用。
 如果无法作到以上模式,以下基本要求必须做到:
1.四个区域必须是相互独立的;
2.各区的仪器设备及各种物品必须是专用的;
3.各区完全独立,缓冲间可有可无。如为一个区套一个区的模式,区间不能直通,应有缓冲间,供换工作服及鞋子用,并保证两个区域间始终处于完全的分隔状态;
4.产物分析区应安装排风扇或其它抽风装置,维持负压。
实验室空调通风系统设计及压力控制
 各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
实验室装修
 实验室的墙体,包括顶棚,应结构牢固、气密性好;所有阴角宜采用圆弧形线条过渡;墙体内壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
实验室边台产品参数
产品名称 益阳实验台 材质 钢木结构
设计用途 实验室操作平台 生产地区 广东深圳
尺寸 根据客户的实际需要X750/1500X850mm 实行标准 实验室行业标准
 
 
 
 
产品描述:
选用优质C字型方钢框架和环保型中密度板制造的益阳钢木实验台,益阳实验台。台面耐酸碱、抗腐蚀,承载力强是湖南省益阳市企事业单位可以选择的实验室操作台之一。
产品材料详细配置说明如下:
实验台框架是以优质C型钢为支撑,所以也简称益阳钢木实验台。
1、框架:采用40x60x1.5mm厚优质钢材,经牢固焊接,表面酸洗、磷化、电泳、防锈处理、环氧树脂高压静电粉末喷涂。具有防腐性好、紧密坚固、美观、承载力≥300kg等特点。
2、台面:采用国际、实验室行业通用_实芯理化板。其耐化学腐蚀、耐高温180℃,抗刻刮性能好。
3、箱体:板材采用优质中密度板,所有箱体板和门、抽屉面板均双面粘压三聚氰胺板,全部截面PVC热熔胶防水封边处理,具有防腐、防火、防蛀等性能。
4、柜底离地面约150mm,可微调,便于地面清扫。
5、不锈钢承重可调节高度地脚,调整范围>30mm。
6、台面:还可以选用更加耐酸碱,抗腐蚀的环氧树脂板、陶瓷台面板等产品。
微生物实验室设计
 微生物实验室由准备室、洗涤室、灭菌室、无菌室、恒温培养室和普通实验室六部分组成。这些房间的共同特点是地板和墙壁的质地光滑坚硬,仪器和设备的陈设简洁,便于打扫卫生。
 二、微生物实验室基本要求
 (一)准备室
 准备室用于配制培养基和样品处理等。室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱和上下水道、电源等。
 (二)洗涤室
 洗涤室用于洗刷器皿等。由于使用过的器皿已被微生物污染,有时还会存在病原微生物。因此,在条件允许的情况下,好设置洗涤室。室内应备有加热器、蒸锅,洗刷器皿用的盆、桶等,还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。
 (三)灭菌室
 灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌,室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。
 (四)无菌室
 无菌室也称接种室,是系统接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室。在微生物工作中,菌种的接种移植是一项主要操作,这项操作的特点就是要保证菌种纯种,防止杂菌的污染。在一般环境的空气中,由于存在许多尘埃和杂菌,很易造成污染,对接种工作干扰很大。
1. 无菌室的设置
 无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。其基本要求有以下几点:
 (1)无菌室应有内、外两间,内间是无菌室,外间是缓冲室。房间容积不宜过大,以便于空气灭菌。小内间面积2*2.5=5m2,外间面积1*2=2m2,高以2.5m以下为宜,都应有天花板。
 (2)内间应当设拉门,以减少空气的波动,门应设在离工作台远的位置上;外间的门好也用拉门,要设在距内间远的位置上。
 (3)在分隔内间与外间的墙壁或隔扇上,应开一个小窗,作接种过程中必要的内外传递物品的通道,以减少人员进出内间的次数,降低污染程度。小窗宽1500px、高1000px、厚750px,内外都挂对拉的窗扇。
 (4)无菌室容积小而严密,使用一段时间后,室内温度很高,故应设置通气窗。通气窗应设在内室进门处的顶棚上(即离工作台远的位置),好为双层结构,外层为百叶窗,内层可用抽板式窗扇。通气窗可在内室使用后、灭菌前开启,以流通空气。有条件可安装恒温恒湿机。
2. 无菌室内设备和用具
 (1)无菌室内的工作台,不论是什么材质、用途的,都要求表面光滑和台面水平。
 (2)在内室和外室各安装一个紫外灯(多为30W)。内室的紫外线灯应安装在经常工作的座位正上方,离地面2m,外室的紫外线灯可安装在外室中央。
 (3)外室应有专用的工作服、鞋、帽、口罩、盛有来苏儿水的瓷盆和毛巾、手持喷雾器和5%石炭酸溶液等。
 (4)内室应有酒精灯、常用接种工具、不锈钢制的刀、剪、镊子、70%的酒精棉球、工业酒精、载玻璃片、特种蜡笔、记录本、铅笔、标签纸、胶水、废物筐等。
 
 
 
3. 无菌室的灭菌消毒
 (1)薰蒸:这是无菌室灭菌的措施。无菌室使用了较长时间,污染比较严重时,应进行薰蒸灭菌。可用甲醛、乳酸或硫磺薰蒸。
 (2)喷雾:在每次使用无菌室前进行。喷雾可促使空气中微粒及微生物沉降,防止桌面、地面上的微尘飞场,并有杀菌作用。可用5%石炭酸喷雾。
 (3)紫外线照射:在每次使用无菌室前进行。紫外线有较好的杀菌效果。通常应开启紫外线灯照射30~60min。
4. 无菌室工作规程
 (1)无菌室灭菌。每次使用前开启紫外线灯照射30min以上,或在使用前30min,对内外室用5%石炭酸喷雾。
 (2)用肥皂洗手后,把所需器材搬入外室;在外室换上已灭菌的工作服、工作帽和工作鞋,戴好口罩,然后用2%煤酚皂液将手浸洗2分钟。
 (3)将各种需用物品搬进内室清点、就位,用5%石炭酸在工作台面上方和操作员站位空间喷雾,返回外室,5~10min后再进内室工作。
 (4)接种操作前,用70%酒精棉球擦手;进行无菌操作时,动作要轻缓,尽量减少空气波动和地面扬尘。
 (5)工作中应注意安全。如遇棉塞着火,用手紧握或用湿布包裹熄灭,切勿用嘴吹,以免扩大燃烧;如遇有菌培养物洒落或打碎有菌容器时,应用浸润5%石炭酸的抹布包裹后,并用浸润5%石炭酸的抹布擦拭台面或地面,用酒精棉球擦手后再继续操作。
 (6)工作结束,马上将台面收拾干净,将不应在无菌室存放的物品和废弃物全部拿出无菌室后,对无菌室用5%石炭酸喷雾,或开紫外线灯照射30min。
 (五)恒温培养室
1. 培养室的设置
 (1)培养室应有内、外两间,内室是培养室,外室是缓冲室。房间容积不宜大,以利于空气灭菌,内室面积在3.2*4.4=14m2左右,外室面积在3.2*1.8=6m2左右,高以2.5m左右为宜,都应有天花板。
 (2)分隔内室与外室的墙壁上部应设带空气过滤装置的通风口。
 (3)为满足微生物对温度的需要,需安装恒温恒湿机。
 (4)内外室都应在室中央安装紫外线灯,以供灭菌用。
2. 培养室内设备及用具
 (1)内室通常配备培养架和摇瓶机(摇床)。常用的摇瓶机有旋转式、往复式两种。
 (2)外室应有专用的工作服、鞋、帽、口罩、手持喷雾器和5%石炭酸溶液、70%酒精棉球等。
3. 培养室的灭菌、消毒 同无菌室的灭菌、消毒措施。小规模的培养可不启用恒温培养室,而在恒温培养箱中进行。
 (六)普通实验室
 进行微生物的观察、计数和生理生化测定工作的场所。室内的陈设因工作侧重点不同而有很大的差异。一般均配备实验台、显微镜、柜子及凳子。实验台要求平整、光滑,实验柜要足以容纳日常使用的用具及药品等。
 (七)实验室其他要求
 水、电、气等的容量、布设、性能均应满足实验室工作的需要。
钢木实验台:
产品参数:
产品名称 钢木实验台 材质 钢木结构
设计用途 实验室工作平台 生产地区
尺寸 根据客户实际需要X750/1500X850mm 实行标准 实验室行业标准
产品描述
选用优质镀锌方钢框架和环保型中密度板,实验室专用实芯理化板台面制造的钢木实验台,外形美观。
产品材料详细配置说明如下:
1、台面:优质实芯理化板厚12.7mm,台面边缘加厚至25.4mm,耐酸碱防腐蚀;
2、框架:采用40*60mm冷轧钢框架结构,表面酸洗、磷化后高压静电粉末喷涂;
3、箱体:采用优质中密度板,双面粘压三聚氰胺板,PVC热熔胶封边,总厚15mm;
4、地脚:采用不锈钢与尼龙组合一体的可调地脚,具有防滑减震,高低可调的功能,可调高度50mm;
5、滑道:采用优质静音三级滑道;
6、铰链:广东省优质DTC五金115°全开式金属铰链;
7、拉手:铝合金暗拉手。
GMP无菌洁净实验室
GMP领域的常规品质控制区,它与生产区、仓储区、办公区、水电气动力区构成常见的GMP工厂(药厂、医疗器械厂、食品厂、化妆品厂等)。
常规品质控制区包含无菌实验区、留样取样间、理化实验室、研发实验室。
多数工厂其中的无菌实验区常见的划分为非洁净区的准备间及万级(2013新版GMP中C级)的阳性对照间、无菌检测间、微生物限度检测间、其分设的人净房辅助间(一更洗手、二更穿无菌服、手消缓冲、洗衣、洁具、工位器具洗存)。
3个万级(2013新版GMP中C级)的阳性对照间、无菌检测间、微生物限度检测间中,阳性对照间做相对负压、空调独立全新风+过滤后排风;
三个实验室内配超洁净工作台。阳性对照间用生物安全柜与否甲方决定,现行规范无强制要求。
 温湿度规范要求:22±2℃,RH=45%~65%;这有别于低级别的生产区(18~28℃);是否采用恒温恒湿空调机?理论上要,就国内多数地区室外气象参数
PCR基因扩增实验室工程
PCR实验室又叫基因扩增实验室。PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称。是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统,能迅速掌握患者体内的病毒含量,其精确度高达纳米级别。
 
 
 
1、必须拥有标准的的PCR荧光实验室;
实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems企业推出,由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前已得到广泛应用。本文试就其定量原理、方法及参照问题作一先容
2、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求;
荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析App,构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系统。
3、必须通过国家临床检验中心的验收和认证;
4、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书;
PCR实验室内工作人员必须参加由国家卫生部或各省临床检验中心举办的临床基因扩增培训班,并持证上岗。PCR实验室通过验收,实验室至少必须应有两个以上持有“临床基因检测上岗证”。PCR实验室必须建立严格的实验室管理制度、建立标准化操作程序(SOP)、建立系列质量管理文件等,确保实验室日常运行符合国家卫生部的要求,确保检测结果准确、确保实验室卫生安全,确保实验室长期稳定运行
全钢实验室台
采用1.0mm厚,优质双面镀锌钢板在数控中心、剪裁、定位打孔、折弯焊接后成型。酸洗磷化处理,喷涂环氧树脂粉末,高温烘烤固化,附着力高、表面硬度抗腐蚀性强,外形美观的全钢实验室台,全钢边台是实验室科研人员可以选择的实验室工作台之一。
产品参数
产品名称 全钢实验室台 材质 全钢结构
设计用途 实验室工作平台 生产地区
尺寸 根据客户实际需要X750/1500X850mm 实行标准 实验室行业标准
产品描述
 
全钢实验室台,全钢实验台,全钢边台:采用1.0mm厚,优质双面镀锌钢板在数控中心、剪裁、定位打孔、折弯焊接后成型。酸洗磷化处理,喷涂环氧树脂粉末,高温烘烤固化,附着力高、表面硬度抗腐蚀性强,外形美观的全钢实验室台,全钢边台是实验室科研人员可以选择的实验室工作台之一。
产品生产工艺简单先容如下:
所有钢板焊接经环氧树脂喷涂后,目视平整无焊点,所有水、电、气路安全,适用,隐藏安装。并在柜体后背板设有维修孔。
产品材料详细配置说明如下:
1、外壳:采用1.0mm厚,优质双面镀锌钢板在数控中心、剪裁、定位打孔、折弯焊接后成型,酸洗磷化处理,喷涂环氧树脂粉末,高温烘烤固化,附着力高,表面硬度抗腐蚀性强,外形美观。
2、门板:斜口式,采用1.0mm厚双面镀锌钢板(双层),无焊连接可拆卸带减震垫。在数控中心、剪裁、定位打孔、折弯焊接后成型。酸洗磷化处理,喷涂环氧树脂粉末,高温烘烤固化。 附着力高,表面硬度抗腐蚀性强,外形美观。
3、把手:不锈钢亚光把手或者凹字型拉手。
4、铰链:配置广东东泰DTC铰链,外形美观,开合无噪音,次数达5万窗拿牌咸丫┕俜酵驹上。防锈、耐腐蚀能力强,达到国际五金行业标准。并配有格拉斯导轨。
5、调整脚:采用10mm注塑调整脚,防震、防潮、耐腐蚀,可根据室内地坪情况适当调节柜体高度,大调节为0—30mm。
6、台面:12.7mm厚优质实芯理化板,耐酸碱抗腐蚀。
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